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測序試劑盒的捕獲具體步驟

更新時間:2025-04-02 點擊次數:218
測序試劑盒的捕獲步驟通常指的是在基因組測序過程中,如何從樣本中選擇和富集特定的目標區(qū)域。捕獲步驟通常與目標區(qū)域捕獲(TargetedCapture)技術相結合,主要用于高通量測序(NGS)中,通過選擇性地捕獲特定DNA片段以提高分析的靈敏度和準確性。下面是捕獲步驟的概述:  
1.樣本準備  
首先,需要從樣本中提取DNA。樣本可以是血液、組織、唾液等,提取過程會根據不同的樣本類型選擇不同的提取方法。提取后的DNA會被質控,以確保其質量和完整性滿足后續(xù)實驗的要求。  
2.DNA片段化  
為了便于后續(xù)的捕獲和測序,提取到的DNA需要經過片段化。這一步驟通過物理(例如超聲波破碎)或酶切(如限制性內切酶)的方法將DNA分解成適合捕獲的小片段。  
3.目標區(qū)域設計與探針合成  
根據研究的需要,選擇目標區(qū)域(例如特定基因、外顯子或其他感興趣的序列)。然后,合成與這些目標序列互補的探針。探針通常是固定在微珠或其他固相支持物上的寡核苷酸序列。這些探針可以與樣本中的目標DNA序列特異性結合。  
4.目標區(qū)域富集(捕獲)  
在這一步,添加合成的探針與片段化的DNA進行雜交。探針與目標區(qū)域序列結合后,未結合的非目標DNA序列會被洗脫掉。這個過程可以通過反應體系中的條件控制,使目標DNA區(qū)域與探針特異性結合。  
5.洗脫  
捕獲了目標序列后,使用洗滌步驟去除非特異性結合的雜散DNA。通過一定的鹽濃度和溫度控制,確保只有目標DNA區(qū)域被保留下來,而其他無關序列被去除。  
6.擴增(可選)  
有時,為了提高捕獲序列的量,捕獲后的DNA片段會進行PCR擴增。這一步是為了增加目標區(qū)域的信號強度,以確保后續(xù)測序的靈敏度。  
7.文庫構建  
捕獲后的目標區(qū)域DNA可以直接用于文庫構建。文庫構建過程中,DNA片段的兩端會連接適配器,以便后續(xù)的測序平臺進行識別和擴增。  
8.測序  
文庫構建完成后,將其加載到高通量測序平臺(如Illumina、BGISEQ等)進行測序,獲取高質量的序列數據。  
總結  
捕獲步驟的關鍵在于目標區(qū)域的選擇、探針設計以及洗脫過程,通過精確的操作,可以確保只富集出感興趣的區(qū)域,從而提高測序的效率和準確性。

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