技術(shù)文章
- 一文帶你了解qPCR原理與流程,建議收藏再看!
- 一種重組人粒細(xì)胞刺激因子的生產(chǎn)方法
- 細(xì)胞培養(yǎng)輔助試劑的檢查和觀察方法
- T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基的開發(fā)與應(yīng)用,助力免疫疾病治療新突破
- 細(xì)胞凍存液的功能及配比介紹
- 高效準(zhǔn)確:淋巴細(xì)胞分離液在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用
- 優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程:淋巴細(xì)胞分離液助力免疫細(xì)胞分析新突破
- 流式細(xì)胞術(shù)之檢測(cè)工作原理
- Corning SyntheGel基質(zhì)膠系列,升級(jí)您的iPSC細(xì)胞治療研究
- 細(xì)胞培養(yǎng)輔助試劑的基本實(shí)驗(yàn)操作
日前,《TheScientist》雜志評(píng)選出了 2013 年度生命科學(xué)領(lǐng)域 10 大創(chuàng)新性及競(jìng)爭(zhēng)力的產(chǎn)品與技術(shù)。(因有兩項(xiàng)并列排名,實(shí)為12項(xiàng))
1) nVista HD
Inscopix開發(fā)的微型熒光顯微鏡nVista HD (mini fluorescence microscope)對(duì)神經(jīng)元功能和神經(jīng)環(huán)路研究意義重大。以往難于檢測(cè)自由活動(dòng)的狀態(tài)動(dòng)物的神經(jīng)活動(dòng):常規(guī)顯微鏡太大,電生理技術(shù)則難兼顧到單細(xì)胞活動(dòng)和整個(gè)腦神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)活動(dòng)這兩個(gè)層面。nVista HD能真正實(shí)現(xiàn)單神經(jīng)元細(xì)胞水平觀測(cè)、同時(shí)實(shí)時(shí)檢測(cè)多達(dá)數(shù)千神經(jīng)元的活動(dòng),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)整個(gè)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的觀測(cè);nVista HD只有兩克重,動(dòng)物帶著它可以自由的活動(dòng),從而能完成對(duì)特定行為學(xué)任務(wù)的研究。
2) X-MAN
傳統(tǒng)報(bào)告質(zhì)粒是在過表達(dá)模式下工作的,不能反映生理表達(dá)量下的情況。Promega開發(fā)的X-MAN報(bào)告系統(tǒng)則不同,其細(xì)胞株含內(nèi)在的報(bào)告子,不需要使用傳統(tǒng)的報(bào)告質(zhì)粒,該類試劑盒包括兩種類型:一種為含NanoLuc luciferase報(bào)告子的細(xì)胞株,無需高表達(dá),在生理表達(dá)量下即可開展檢測(cè);另一種為含HaloTag的細(xì)胞株,該細(xì)胞株應(yīng)用更廣泛:興趣蛋白與HaloTag表達(dá)后,可以通過添加熒光蛋白檢測(cè)目標(biāo)蛋白與其它蛋白的相互作用。
2) SmartFlare RNA 探針
EMD Millipore開發(fā)的SmartFlare RNA檢測(cè)探針(SmartFlare RNA Detection Probes)無需抗體,無需殺死細(xì)胞,*在生理狀態(tài)下,通過熒光檢測(cè)內(nèi)源性RNA。SmartFlare RNA Detection Probes檢測(cè)以往使用固定的死細(xì)胞開展實(shí)驗(yàn)的方式不同,是在活細(xì)胞環(huán)境下開展,具有重要意義:針對(duì)靶RNA的寡核苷酸與納米金顆粒結(jié)合,與細(xì)胞孵育過夜,從而經(jīng)胞吞攝入后,與靶基因RNA分子結(jié)合,即可通過流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè),而這個(gè)外源性分子在幾天后可通過胞吐排除,細(xì)胞又恢復(fù)原有狀態(tài)。
3) SR GSD 3D
熒光顯微鏡的分辨率約為200 nm,即便是高分辨率顯微鏡,雖然XY平面上分辨率可達(dá)20 nm,但在Z軸只能達(dá)到600–700 nm的分辨率,不能用于觀測(cè)三維分子結(jié)構(gòu)。Leica Microsystems的SR GSD 3D成像系統(tǒng),在XY平面上分辨率為20 nm,同時(shí)在Z軸達(dá)到70 nm的分辨率。其圓柱形鏡頭結(jié)合軟件使這種顯微鏡能判斷出某點(diǎn)與觀測(cè)平面的相對(duì)位置(上還是下),并將相應(yīng)信息合成為3D影像。利用這種顯微鏡使細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯現(xiàn)接近了光鏡水平,更助于了解細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)和功能。
4) NanoString
乳腺癌患者因擔(dān)心腫瘤復(fù)發(fā)易導(dǎo)致過度醫(yī)療,既浪費(fèi)金錢,并導(dǎo)致傷害。NanoString開發(fā)的乳腺癌預(yù)后基因信號(hào)芯片(Prosigna Breast Cancer Prognostic Gene Signature Assay)通過檢測(cè)乳腺癌患者腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)譜,可判斷患者腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。如果患者對(duì)內(nèi)分泌治療反應(yīng)良好,通過這種芯片評(píng)分就能評(píng)估病人是否有必要開展化療和放療。這種芯片同樣能判斷乳腺癌病理類型,相比臨床上常用的幾種biomarker,其能提供更多的生物學(xué)信息。而且這種技術(shù)花費(fèi)低,不需要在專業(yè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成,可直接在臨床應(yīng)用。
5) ClearColi
大腸桿菌含潛在的病原體LPS,以大腸桿菌為模式生物生產(chǎn)生物制品要面對(duì)復(fù)雜的產(chǎn)品純化問題。Lucigen開發(fā)的大腸桿菌ClearColi不表達(dá)LPS,而是表達(dá)LPS的無毒前體脂IVA。當(dāng)前,他們正在致力于將這種大腸桿菌商業(yè)化,希望開發(fā)出能承載質(zhì)粒的菌株,該型菌株既能像實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用的大腸桿菌一樣生產(chǎn)生物產(chǎn)品,同時(shí)又沒有內(nèi)毒素污染的問題。
6) 人性化的細(xì)菌熒光素酶
分子生物學(xué)家將細(xì)胞內(nèi)插入生物熒光基因來檢測(cè)藥效和毒性,其中zui常用的是Firefly熒光酶。這類技術(shù)一個(gè)顯著的缺點(diǎn)是必須殺死細(xì)胞,加入外源性試劑來顯示熒光素酶活性,即指利用此類技術(shù)開展藥物毒性研究的話,實(shí)驗(yàn)不能連續(xù)性開展,而只能選在不同的時(shí)間點(diǎn)來分別測(cè)定。490 BioTech開發(fā)的細(xì)菌熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)則不同,它不需要添加外源性物質(zhì),不需殺死細(xì)胞。490 BioTech已經(jīng)能夠在多種細(xì)胞類型內(nèi)引入這種細(xì)菌熒光素酶系統(tǒng),包括多種人源細(xì)胞株,而且可根據(jù)客戶實(shí)驗(yàn)需要來訂做相應(yīng)產(chǎn)品。雖然490 BioTech的細(xì)菌熒光素酶熒光強(qiáng)度比Firefly弱,但是其觀測(cè)的實(shí)時(shí)性和連續(xù)性具有其它實(shí)驗(yàn)方法*的優(yōu)勢(shì)。
7) Syn Vivo
CFD的SynVivo是一種人工合成的、模擬體內(nèi)血管環(huán)境的微流體芯片,是用于模擬體內(nèi)實(shí)際液流和幾何學(xué)特征的體外模型。SynVivo由20個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的芯片組成,可模擬倉(cāng)鼠、大鼠和小鼠不同血管的幾何學(xué)特征。芯片含有可培養(yǎng)細(xì)胞的腔隙,可用來研究細(xì)胞(如神經(jīng)元細(xì)胞,肝細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等)與藥物、循環(huán)分子間的相互作用。研究者只需將芯片的孔道覆蓋fibronectin類物質(zhì)來模擬體內(nèi)環(huán)境,進(jìn)而在孔道上培養(yǎng)細(xì)胞,讓液體在上面流動(dòng)模擬自然情況下體內(nèi)微血管網(wǎng)內(nèi)的血液,從而在近似體內(nèi)真實(shí)環(huán)境中研究所感興趣細(xì)胞的功能。
8) ADCC報(bào)告生物法
我們的皮膚可感知碰撞力,并主動(dòng)反饋躲避危險(xiǎn)。由金屬或是硬塑料做成的機(jī)器人則沒有這種能力。SynTouch LLC開發(fā)的NumaTac是由網(wǎng)狀聚氨酯泡沫做成的墊子,并在其中加入感受器讓機(jī)器能感觸、并對(duì)碰撞力作出反應(yīng)。這種泡沫材料可以根據(jù)要求任意塑性,讓機(jī)器臂如人手臂那樣能感觸危險(xiǎn)并及時(shí)作出反應(yīng),從而避免與硬物碰撞導(dǎo)致?lián)p傷,這類材料具有廣闊的應(yīng)用前景。
9) NOMe-Seq試劑盒
單克隆抗體治療在腫瘤和自身免疫性疾病中應(yīng)用較廣,常使用抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(ADCC)報(bào)告系統(tǒng)評(píng)估單克隆抗體治療的療效。但很多人對(duì)ADCC報(bào)告系統(tǒng)并不滿意:效應(yīng)細(xì)胞辨認(rèn)靶細(xì)胞上的抗體并攻擊靶細(xì)胞,可是因效應(yīng)細(xì)胞的變異性太大,相同的抗體,在不同的時(shí)間用該報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)所得結(jié)果差異很大。為了發(fā)展可靠的檢測(cè)方法,Promega開發(fā)了新型ADCC報(bào)告系統(tǒng)(ADCC Reporter Bioassay):Promega研發(fā)人員從永生化細(xì)胞系開發(fā)人源的工程T細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞,做出了這一穩(wěn)健、便捷的實(shí)驗(yàn)報(bào)告系統(tǒng),使用該系統(tǒng)評(píng)估ADCC能節(jié)省大量時(shí)間,提高了工作效率。
10) NOMe-Seq
在表觀遺傳學(xué)上,DNA甲基化和核小體排布調(diào)節(jié)著基因的表達(dá),因此需要分別檢測(cè)DNA甲基化和相應(yīng)位置的核小體狀況來了解基因的轉(zhuǎn)錄狀況。Active Motif的新技術(shù)NOMe-Seq (Nucleosome Occupancy and Methylome Sequencing)能讓研究人員同時(shí)檢測(cè)DNA分子的甲基化和核小體排布情況。NOMe-Seq實(shí)驗(yàn)開始時(shí),人工甲基化那些不被包裹在核小體內(nèi)的、固定的染色質(zhì)的GpC殘基,然后逆轉(zhuǎn)交聯(lián),釋放核小體及其上結(jié)合的蛋白(例如轉(zhuǎn)錄因子),然后DNA經(jīng)雙亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化(bisulfite conversion),使未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,然后通過DNA測(cè)序確定DNA甲基化譜和被GpC甲基化保護(hù)的核小體印跡(footprint)。
10) 定量多重內(nèi)標(biāo)
二代測(cè)序等技術(shù)定量所得結(jié)果面臨者證實(shí)困難等諸多問題。Horizon Diagnostics開發(fā)的定量多重內(nèi)標(biāo)(Quantitative Multiplex Reference Standard)由30種突變組成,在樣品準(zhǔn)備時(shí)摻入,可用于證實(shí)不同實(shí)驗(yàn)技術(shù)、不同實(shí)驗(yàn)室間的重復(fù)性和有效性。