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關(guān)于細(xì)胞凍存液凍存與復(fù)蘇的操作守則
點(diǎn)擊次數(shù)：1484 更新時(shí)間：2017-11-07
上一篇我們講到了細(xì)胞凍存液的使用注意事項(xiàng)，今天呢細(xì)胞凍存液廠家小編就給大家?guī)砑?xì)胞凍存液的凍存與復(fù)蘇的操作方法
細(xì)胞凍存液的凍存和復(fù)蘇操作步驟：
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇采取“慢凍快融”的原則，慢速冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水份滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)形成冰晶的機(jī)會(huì)，快融以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化，避免慢速融化水份滲入細(xì)胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)冰晶造成對(duì)細(xì)胞的損傷。
（一）細(xì)胞凍存液細(xì)胞凍存
配制含10%DMSO或甘油的細(xì)胞凍存液，4℃預(yù)冷（新鮮配制的凍存液會(huì)產(chǎn)生大量的熱）；
取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，用細(xì)胞消化酶將單層生長的細(xì)胞消化下來；懸浮細(xì)胞則直接將細(xì)胞收集到離心管中；
離心1200rpm，6 min；
去除上清液，逐漸加入適量預(yù)冷的細(xì)胞凍存液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中的細(xì)胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml；
將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1~1.5ml；
在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱、凍存時(shí)間及操作人員姓名；
凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min；到達(dá)-80℃時(shí)，則可迅速放入液氮中。
（二）細(xì)胞凍存液細(xì)胞復(fù)蘇
佩戴眼鏡和手套，從液氮中取出凍存的細(xì)胞管。
迅速放入38℃水浴中，并不時(shí)搖動(dòng)，在1分鐘內(nèi)使其*融化，然后在無菌條件下取出細(xì)胞。
1200rpm/min離心5-10min，棄去上清，加入適量培養(yǎng)液混勻后接種于培養(yǎng)瓶中，次日更換一次培養(yǎng)液
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